培養基的主要成分有氮源、碳源、無機鹽、水分及一些生長因子,它們主要為細菌的生長繁殖提供營養和生長環境。
水:水是良好的溶劑,細菌所需要的營養物質必須先溶于水,營養的吸收與代謝均需有水才能進行。制備培養基常用不含雜質的蒸餾水或離子交換水。
氮源:氮源主要用于構成菌體細胞物質(氨基酸、蛋白質、核酸等)和含氮代謝物。常用的氮源可分為兩大類:有機氮源和無機氮源。
碳源:碳源是組成培養基的主要成分之一。常用的碳源有糖類、油脂、有機酸和低碳醇。在特殊情況下(如碳源貧乏時),蛋白質水解產物或氨基酸等也可被某些菌種作為碳源使用。
無機鹽:無機鹽是細胞維持生命活動所的營養成分,主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl-、PO43-、SO42-、HCO3-等,主要作用為維持細胞培養液滲透壓平衡,參與細胞的代謝活動。此外,通過提供鈉,K+和Ca2+,幫助細胞調節細胞膜功能。
注意事項:
培養基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應該注意以下事項:
確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認并排除。
同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中,可以從配制好的培養液中取少量加入營養瓊脂于恒溫培養箱內培養,48小時即可觀察有無污染。